探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒的優(yōu)勢和測量原理
探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒的熒光PCR是使用聚合酶鏈式反應(PCR)進(jìn)行的核酸同步擴增和檢測/定量的方法。
探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒具有顯著(zhù)的優(yōu)勢，可以實(shí)現基因表達的精確定量。特異性好，大大降低了檢測的假陽(yáng)性，靈敏度高，采用靈敏的熒光檢測系統對熒光信號進(jìn)行實(shí)時(shí)監控，操作簡(jiǎn)單，無(wú)PCR產(chǎn)物污染。省去了最麻煩的基因序列查詢(xún)、引物探針設計、PCR擴增條件優(yōu)化等大量費時(shí)、費力、費錢(qián)的繁瑣工作。探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問(wèn)題，反應結束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線(xiàn)檢測，縮短了實(shí)驗時(shí)間。
探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒的原理在于PCR擴增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個(gè)報告熒光基團和一個(gè)淬滅熒光基團。探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收。正常情況下兩個(gè)基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。當擴增延伸到探針結合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產(chǎn)物的數量成正比，因此，根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。
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