原來(lái)探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒是利用了這一原理進(jìn)行檢測的
熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴增過(guò)程中,隨著(zhù)PCR循環(huán)數的遞增,PCR產(chǎn)物不斷積累,熒光信號也會(huì )相應的增加,這樣就可以通過(guò)熒光強度的變化來(lái)對PCR反應進(jìn)行實(shí)時(shí)的監測。探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒通過(guò)對DNA或RNA的熒光定量PCR監測,可以實(shí)現基因的相對定量、定量和定性分析。
熒光是指一種光致發(fā)光的冷發(fā)光現象。當某種常溫物質(zhì)經(jīng)某種波長(cháng)的入射光照射,吸收光能后進(jìn)入激發(fā)態(tài),并且立即退激發(fā)并發(fā)出比入射光的波長(cháng)長(cháng)的出射光。其原理為:光照射到某些原子時(shí),光的能量使原子核周?chē)囊恍╇娮佑稍瓉?lái)的軌道躍遷到了能量更高的軌道,即從基態(tài)躍遷到第一激發(fā)單線(xiàn)態(tài)或第二激發(fā)單線(xiàn)態(tài)等。第一激發(fā)單線(xiàn)態(tài)或第二激發(fā)單線(xiàn)態(tài)等是不穩定的,所以會(huì )恢復基態(tài),當電子由第一激發(fā)單線(xiàn)態(tài)恢復到基態(tài)時(shí),能量會(huì )以光的形式釋放,所以產(chǎn)生熒光。與傳統PCR一樣,探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒反應在溫度模塊里循環(huán)進(jìn)行;理論上每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)目的基因的數量都會(huì )增加一倍;每個(gè)循環(huán)結束后,定量PCR儀器通過(guò)不同的濾光片記錄熒光信號;在擴增過(guò)程中,熒光信號隨著(zhù)PCR產(chǎn)物的增加而增強。
探針?lè )晒釶CR檢測試劑盒探針?lè )ǖ谋举|(zhì)是利用了熒光共振能量轉移現象,探針上存在一對能產(chǎn)生熒光共振能量轉移的基團,利用PCR反應中的一些過(guò)程(酶切,雜交等),使兩個(gè)基團的距離產(chǎn)生變化,使系統中的熒光強度或者熒光種類(lèi)發(fā)生變化,這種變化又與PCR產(chǎn)物的種類(lèi)和量有直接關(guān)系,通過(guò)檢測這種變化,我們就可以檢測出PCR反應體系中產(chǎn)物的種類(lèi)和量。